น่าแปลกในที่ ใน lab นี้เราคิดว่าอาจารย์จะให้ลงมือทำเอง
แต่ไม่ใช่เลย อาจารย์ให้แค่นั่งดู ผลที่อาจารย์ทำไว้แล้ว
เรื่องน่าตื่นเต้น จึงหมดลง เอาเป็นว่าแค่ดูสีก็แล้วกัน
แต่ หลอดที่อาจารย์เอามาให้ดูมีไม่ครบทุกการทดลอง
เอาเป็นว่าลงเท่าที่ ถ่ายรูปมาแล้วกันคับพีน้อง
คุณสมบัติทางชีวเคมีเหล่านี้จะสามารถแยกย่อยกลุ่มของ Bacteria ลงไปได้เป็น กลุ่มที่แตกต่างกัน
การทดสอบ INDOLE TEST
จุดประสงค์ : แบคทีเรียที่ทดสอบนั้น สามารถสลายสารตั้งต้น tryptophan ได้หรือไม่
,ทดสอบการสร้าง INDOLE โดย enz tryptophanase
หลักการ :enz. tryptophanase สามาระเปลี่ยนกรดอะมิโน tryptophan เป็น indole ammonia และ pyruvic
ซึ่งการทดสอบนี้จะทำให้เกิดสาร indole ที่เมื่อทำปฏิกริยา กับ Kovac's reagent ที่
tryptophan -------------------->indole + kovac's reagent
(tryptophanase)
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้คือ SIM MEDIUM
วิธีการ : หยดสารละลาย kovac's reagent ถ้าให้สารประกอบสีแดงชมหูหรือบานเย็น ถือเป็น possitve
________________________________
CARBOHYDRATE FERMENTATION TEST
จุดประสงค์ : เพื่อทดสอบความสามารถของแบคทีเรียในการหมักน้ำตาลชนิดต่างๆ
(ในการทดลองนี้คือ Lactose test)
หลักการ : การหมักเป็นขบวนการเมตะบอลิซึมที่มีตัวรับอิเลกตรอนตัวสุดท้ายเป็นสารอินทรีย์
การทดสอบนี้ใช้ phenol red เป็น pH indicator เป็นสารอาหารพื้นฐาน เมื่อต้องการทดสอบน้ำตลชนิดใดก็เติมน้ำตาล
ชนิดนั้นลงไป ในปริมาณ 1 % phenol red เมื่ออยู่ในสภาวะเป็นกรดจะให้สีเหลือง
และเมื่ออยู่ในสภาวะด่างจะให้สีชมพู
วิธีการทดสอบ : เติมแบคทีเรียที่ต้องการทดสอบลงไปในอาหารเลี้ยงเชื้อ(Phenol red broth base)แล้วนำไปบ่มเชื้อ
นาน 24-48 ชม.
ถ้าแบคทีเรียสามารถหมักน้ำตาลได้จะให้สภาวะที่เป็นกรดเกิดขึ้น phenol red ให้สีเหลือง ถือเป็น possitive
______________________________________
ESCULIN HYDROLYSIS
จุดประสงค์ : เพื่อทดสอบการสลาย esculin
หลักการ : แบคทีเรียบางชนิดสามารถย่อยสบาย สาร esculin ------> esculetin ได้
และเราสามารถทดสอบการเกิดขึ้นได้โดยการเติม ferric ion ลงไป เพราะเมื่อesculetin
ทำปฏิกริยากับ ferric ion จะได้สารสีดำ เกิดขึ้น นั่นแสดงว่าให้ผล possitive
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้คือ esculin agar
_______________________________
UREASE TEST
จุดประสงค์ : เพื่อทดสอบการสร้าง enz urease ที่เปลี่ยนยูเรียให้เป็นแอมโมเนียได้หรือไม่
วิธีทดสอบ : เติมแบคทีเรียลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ แล้วนำไปบ่มนาน 24 hrs.ใช้ phenol red เป็นอินดิเคเตอร์
ถ้าแบคทีเรียสามารถสร้าง enz urease ได้จะเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นสีชมพู ถือว่าเป็น possitive
ps. อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้คือ urea agar
__________________________________
CITRATE TEST
จุดประสงค์ : เพื่อทดสอบการใช้ citrate เป็นแหล่งคาร์บอนและการสร้างพลังงาน
หลักการ : อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้คือ Simmon's Citrate agar สารอาหารนี้มีสีเขียวซึ่งมี bromthymil blue เป็น
อินดิเคเตอร์ ที่จะเปลี่ยนสีฟ้าเมื่อยู่ในสภาวะที่เป็นด่าง และเป็นสีเหลืองในสภาวะที่เป็นกรด
วิธีการทดสอบ อาหารเลี้ยงเชื้อที่มีลักษณะเอียงเล็กน้อย ให้เติมแบคทีเรียลงไปที่ผิวหน้า (Slant) แล้วนำไปบ่ม 24 hrs. สังเกตสี
ที่เปลี่ยนไปถ้าเปลี่ยนสีรอาหารเลี้ยงเชือ้เป็นสีฟ้าหรือน้ำเงินถือว่าเป็น possitive
_______________________________________
ONPG TEST
The ortho-nitrophenol (ONPG) test
จุดประสงค์ ทดสอบว่าเชื้อมี B-GALACTOCIDASE หรือไม่
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้คือ PEPTONE WATER+ 0.15% o-NITROPHENOL-B-D-GALACTOPYRANOSIDE
ถ้าให้ผล positive จะได้สีเหลือง(เหลืองส้มๆ)
_________________________________________
LDS TEST (ไม่มีในหนังสือแต่มีรูปมาให้ดูกัน)
________________________________________
OF-TEST
จุดประสงค์ : ทดสอบความสามาถของแบคทีเรียในการเมตาบอลิซมน้ำตาลในสภาวะที่มี
ออกซิเจนเป็นองค์ประกอบหรือไม่มีออกซิเจน
ส่วนใหญ่เป็นการตรวจสอบน้ำตาลกลูโคส
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้เป็นแบบกึ่งแข็ง มี bromthymol blue เป็น indicator ทำให้อาหารเลี้ยงเชื้อเป็นสีเขียว
จะทำการทดสอบสองหลอด คือหลอดแรก ปิด ด้วย พาราฟิน ส่วนอีกหลอดไม่ปิดทับด้วยพาราฟิน
วิธีการ : เติมแบคทีเรียนโดยใช้เข็มเขี่ยเชื้อลงไปแล้วปิดทับด้วยพาราฟินหลอดหนึ่งนำไปบ่มเพาะเชื้อ 37 องศาC นาน 24 hrs.
อ่านผล : สังเกตุสีของทั้งสองหลอด ถ้าสีของอาหารเลี้ยงเชื้อทั้งสองหลอด
เปลี่ยนเป็นสีเหลืองทั้งคู่ --------->แบคทีเรียนั้นสามารถใช้ออกซิเจน
ได้ทั้งในสถาวะที่มีออกซิเจนและไม่มีออกซิเจนอ่านว่า "fermentation"
ถ้าสีของเหลือที่ไม่มีพาราฟินปิดทับเปลี่ยนเป็นสีเหลืองแสดงว่า แบคทีเรียนสามารถใช้ออกซิเจน
ได้ในสถาวะที่มีออกซิเจนเท่านั้น อ่านว่า Oxidation
ในกรณีที่ไม่เปลี่ยนแปลงทั้งสองหลอด ---------->แบคทีเรียนั้นไม่สามารถใช้ออกซิเจน
ได้ทั้งในสถาวะที่มีออกซิเจนและไม่มีออกซิเจน อ่านว่า unreaction เป็นพวกธาตุเฉื่อย
____________________________________
NITRATE REDUCTION (ไม่ได้ถ่ายรูปมา)
จุดประสงค์ เพื่อทดสอบการเกิดไนไตรท์ โดยการเติม สาระละลาย สองชนิด (Nitite reagent A,B)
ถ้าให้ผลสีแดงเกิดขึ้นทันทีแสดงว่าให้ผลเป็น possitive
แต่ทั้งนี้ทั้งนั้น เชื้อแบคทีเรียนบางชนิดสามารถเปลี่ยนไนไตรม์ให้เป็นไนโตรเจนได้เพราะฉะนั้นบางครั้ง
เราจึงไม่เห็นสารสีแดงที่เกิดขึ้นดึงนั้นจึงต้องตรวจสอบในขั้นตอนต่อไป
โดยใช้ zinc dust ลงไปเล็กน้อย(เท่าเม็ดถั่วเขียว)
ถ้ามีสารตั้งต้นเหลืออยู่จะทำปฏิกริยากับ zinc dust ให้สารประกอบสีแดง ถือเป็น negative
(บางครั้งให้สีแดงเฉพาะรอบๆzincเท่านั้น)
แต่ถ้าไม่ให้สีแดงเกิดขึ้นหลังจากเติม zinc ถือว่าให้ผลเป็น possitive
สรุป
เชื้อ ----->เติม (Nitite reagent A,B)-------->ให้สีแดง แสดงว่า+ หยุดการทดลอง
l
l
ไม่เปลี่ยนแปลง ------------> เติมzinc dust ---------> ให้สารสีแดงเป็น negative
l
l
ไม่เปลี่ยนแปลงให้ผล possitive
--------------------------------------------------------------------------------------------
ปล.
-เหลือ Gelatin test ที่ไม่ได้ เขียนลงเพราะไม่ได้ถ่ายรูปมา
การอ่านค่าต้องนำสารไปแช่เย็นก่อน จึงจะแยกความแตกต่างได้ว่า
หาก เจลลาตินอยู่ในสภาพเหลวถือว่า possitive
-เหนื่อยมาก เยอะมาก โหวววว 
การเตรียมบ่มเพาะเชื้อ Vet. Bacteria iden. lab
